Germinare e Raccogliere Spore
La germinazione e raccolta delle spore sono passi fondamentali nella coltivazione dei funghi. Si parla spesso di come raccogliere e germinare spore nel modo coretto e ne spiego tutti i dettagli in questo articolo.
Germinazione
Ci concentreremo su tre metodi principali:
1. Germinazione In Cereali
Cereali come frumento, segale o orzo sterilizzati sono il metodo più utilizzato per la germinazione diretta delle spore. Il grain spawn è micelio cresciuto in questi contenitori.
Qui sotto elenco i passaggi a grandi linee, ma se cerchi di più, vai al metodo dettagliato per coltivare funghi allucinogeni.
Processo
- Preparazione del Grain Spawn: Sterilizza i cereali in un autoclave o in una pentola a pressione da almeno 1bar
- Inoculazione: Inietta le spore direttamente nel sacchetto di spawn in un ambiente sterile
- Incubazione: Mantieni il grain spawn in condizioni di temperatura e umidità controllate fino alla comparsa del micelio
Vantaggi
- Facilita l’inoculo senza bisogno di strumenti avanzati
Svantaggi
- Non si può “scegliere” il dikaryon piu forte
- Costo: con una siringa si possono fare tra le 5 e 10 inoculazioni
- Tempo: Il processo di colonizzazione può richiedere più tempo
2. Germinazione in Agar
L’agar è un mezzo di coltura solido utilizzato per la germinazione delle spore e la coltivazione di colture di micelio.
Se vuoi capire meglio il processo, vai all’articolo su come preparo le mie piastre agar.
Processo
- Preparazione dell’Agar: Prepara una piastra di Petri con agar nutritivo sterilizzato
- Inoculazione: Applica le spore sull’agar in condizioni sterili con un tampone sterile di spore*.
- Colonizzazione: Conserva la piastra in un ambiente controllato fino alla crescita del micelio.
*il tampone può essere usato per raccogliere spore direttamente dalle lamine del cappello in ambiente pulito, oppure da una spore print (impronta sporale). Spiego tutto nella sezione di raccolta di spore nella seconda parte dell’articolo.
Vantaggi
- Permette l’isolamento di ceppi specifici
- Utile per l’analisi e la selezione del micelio
- Flessibile per qualsiasi utilizzo
Svantaggi
- Richiede tecniche di laboratorio e attrezzature specifiche
3. Coltura Liquida
La coltura liquida impiega una soluzione nutritiva liquida per una crescita accelerata del micelio partendo da spore.
La ricetta dettagliata per preparare e usare colture liquide è in una bozza che pubblicherò a breve.
Processo
- Preparazione della Soluzione: Crea una soluzione nutritiva sterile (ad esempio con estratto di malto o miele).
- Inoculazione: Introduci le spore nella soluzione in un ambiente sterile.
- Incubazione: Agita la soluzione regolarmente per promuovere la crescita del micelio.
Non inumidire mai l’interno tappo della tua coltura liquida quando la agiti al fine evitare contaminazioni. per aiutarti a mischiare la tua coltura liquida tutti i giorni, puoi mettere una biglia di vetro al suo interno prima della sterilizzazione, oppure un agitatore magnetico.
Vantaggi
- Tempo: Rapida espansione del micelio
- Semplicità di riproduzione: Facile da utilizzare per l’inoculazione di substrati più grandi
Svantaggi
- Contaminazioni: Alto rischio contaminazioni difficili da vedere
La scelta del metodo di germinazione dipende dall’obiettivo della coltivazione, dalle risorse disponibili e dall’esperienza del coltivatore. Ogni metodo ha i suoi pregi e difetti.
Raccolta di Spore
1. Siringa di Spore
Una siringa di spore contiene spore di funghi sospese in una soluzione acquosa. È uno strumento popolare tra i coltivatori per la sua facilità d’uso.
Come Fare Una Siringa di Spore?
La produzione di siringhe di spore sterili può essere un processo delicato che richiede precisione per evitare contaminazioni.
Di seguito troverai una guida passo passo su come procedere.
Materiali Necessari:
- Spore di funghi
- Siringhe sterili luer lock
- Alcool isopropilico (70%) o un altro disinfettante
- Guanti sterili
- Tubi da centrifuga (per la preparazione della soluzione di spore)
- Autoclave o pentola a pressione (per sterilizzare)
- Cappa a flusso laminare o, in alternativa, una SAB.
- Fiamma (bruciatore a gas, induzione o accendino alcolico) per la sterilizzazione degli strumenti.
Opzionale:
- Piastre petri (per germinare le spore e confermare la sterilità)
Procedura:
1. Preparazione e Sterilizzazione del Materiale:
- Metti 25 ml d’acqua di rubinetto in un flacone e sterilizzala utilizzando un’autoclave o una pentola a pressione. Il tempo e la temperatura standard per l’autoclave sono di 121°C per 30 minuti.
- Prepara una zona di lavoro pulita e sterile, preferibilmente con cappa a flusso laminare. Se non disponibile, usa una SAB.
- Indossa guanti sterili e ben disinfettati con alcol per ridurre il rischio di contaminazione.
2. Preparazione della Soluzione di Spore:
- Raccogli le spore con un tampone sterile
- Metti le spore nel tubo da centrifuga sterilizzato contenente acqua sterile. Puoi “staccare” il cotone del tampone oppure usando tutta la punta di cotone del tampone tagliandola e aiutandoti con delle pinze da laboratorio.
- Chiudi e agita delicatamente il flacone per disperdere le spore uniformemente nell’acqua.
3. Riempimento delle Siringhe:
- Aspira la soluzione di spore nel flacone con la siringa
- Se necessario, sigilla l’apertura dell’ago con un cappuccio sterile per prevenire contaminazioni.
4. Verifica della Sterilità:
- Prima di utilizzare le siringhe di spore per la coltivazione, è importante verificare la sterilità. Inocula una piccola quantità della soluzione di spore su agar agar o in un brodo nutriente e incuba per alcuni giorni.
- Controlla la presenza di crescita microbica. L’assenza di crescita indica che la siringa di spore è sterile e pronta per l’uso.
5. Conservazione:
- Conserva le siringhe di spore in un luogo fresco e buio fuori dal frigo fino al loro uso. Alcune spore possono rimanere viable per diversi mesi o perfino anni se conservate correttamente.
Come Utilizzare le Siringhe di Spore
Preparazione: Assicurati di lavorare in un ambiente sterile per evitare contaminazioni.
Inoculazione: Inietta delicatamente la soluzione di spore nel substrato scelto.
Incubazione: Conserva il substrato in un luogo buio e umido fino alla germinazione.
2. Tamponi di Spore
Cos’è un Tampone di Spore?
Il tampone di spore è un metodo che utilizza un piccolo pezzo di cotone o un altro materiale assorbente per raccogliere le spore direttamente dai funghi.
Come Utilizzare i Tamponi di Spore
Raccolta: Strofina delicatamente il tampone sulla superficie sporifera del fungo o impronta sporale.
Deposito: Trasferisci le spore dal tampone al substrato.
Crescita: Mantieni il substrato in condizioni ideali per la crescita dei funghi.
3. Impronte di Spore
Un’impronta di spore si ottiene posizionando un fungo capovolto su una superficie come la carta stagnola, lasciando che le spore cadano e formino un’impronta visibile.
Creazione dell’Impronta
Lascia il cappello del fungo su un foglio di carta stagnola per alcune ore assicurati di disinfettare la carta stagnola con una fiamma.
Opzionalmente, puoi creare più di un impronte con lo stesso fungo.
- Disponi 4 quadrati di stagnola in una scaola per alimenti con tappo
- Raccogli un fungo fresco che abbia rotto il velo da poche ore
- Taglia il cappello con forbici o bisturi ben puliti
- Appoggia il cappello sul primo quadrato di stagnola e spostalo al successivo ogni due ore.
Dopo ogni passaggio, puoi piegare a metà la stagola con l’impronta di spore e riporla in una di queste bustine.
Come usare un’impronta sporale in SAB o cappa:
- Usa un oggetto sterile per raccogliere le spore dall’impronta come per esempio un tampone* o un bisturi sterile.
- Distribuisci sulla petri, oppure fai una siringa come scritto sopra. In casi estremi puoi grattare le spore direttamente nel substrato.
*I tamponi che ho messo nel link sono perfetti per dimensioni, quantità e tipo.
Approfondimenti
Ho creato una sezione avanzata che parla di come gestire diverse fasi della coltivazione.
In questa sezione troverai un articolo che sulla germinazione e la raccolta delle spore.
Ho descritto tre metodi principali di germinazione: cereali, agar e coltura liquida, ciascuno con vantaggi e svantaggi specifici.
La germinazione nei cereali è il metodo più semplice, seguito dall’uso dell’agar per l’isolamento di ceppi e coltura liquida per una riproduzione rapida del micelio.
Troverai anche una sezione dedicata alla raccolta delle spore. Qui vengono presentati tre metodi: siringa di spore, tamponi di spore e impronte di spore.
Troverai anche un processo dettagliato per la preparazione di una siringa di spore sterile, compresi i materiali necessari e le precauzioni da prendere per evitare contaminazioni.
I tamponi di spore e le impronte di spore sono discussi come alternative per raccogliere spore direttamente dai funghi.
Infine, vengono fornite istruzioni su come utilizzare ciascun tipo di campione di spore per inoculare substrati e promuovere la crescita dei funghi.
Il tutto è accompagnato da suggerimenti pratici e consigli per garantire il successo nella coltivazione dei funghi allucinogeni.